PCR Assays

Diet

Reaksi rantai polimerase dianggap salah satu kaedah diagnostik yang paling tepat dan pantas untuk banyak penyakit berjangkit. Ia juga berjaya diterapkan dalam kriminologi untuk memudahkan proses mengenal pasti penjenayah, dengan paternanya membantu ditubuhkan dengan ketepatan yang tinggi.

Intipati kaedah PCR

Setiap organisma hidup, termasuk bakteria dan virus, mempunyai gen unik yang termasuk dalam struktur DNA atau RNA dalam urutan tertentu. Semasa kajian PCR, bahan genetik disalin berulang kali di bawah pengaruh polimerase DNA dan kitaran suhu khusus.

Terdapat dua kaedah utama tindak balas rantai polimerase:

  1. Kaedah klasik adalah pemilihan bahan genetik patogen oleh elektroforesis;
  2. PCR dalam "masa sebenar".

Teknik ini terdiri daripada tiga peringkat utama:

  • Penyediaan sampel;
  • Penguatan DNA;
  • Pengesanan (pengenalpastian) bahan genetik patogen yang disyaki.

Untuk menjalankan kajian, makmal PCR mesti dibahagikan kepada 3 zon; setiap peringkat tindak balas dilakukan dengan ketat di dalam bilik yang dimaksudkan untuk itu. Setiap zon perlu dilengkapi dengan peralatan, dispenser, bahan habis pakai, pakaian pelindung yang digunakan hanya di dalam bilik ini.

Selepas pendaftaran dan pelabelan sampel, dalam bilik penyediaan sampel, DNA patogen atau RNA diasingkan dari bahan yang di bawah kajian dengan pendedahan kepada suhu tertentu dan reagen khusus. Kemudian proses penguatan bermula - mewujudkan banyak salinan fragmen DNA yang unik. Ia terdiri daripada 3 peringkat utama:

  • Denaturasi DNA - di bawah pengaruh suhu tinggi (95 darjah), heliks ganda DNA membongkar ke dalam 2 rantai.
  • Primer Annealing - Sebatian sintetik khas (primer) yang sama dengan maklumat genetik pada hujung serpihan asid nukleik yang dikehendaki dilampirkan kepada istilah rantai DNA. Suhu yang diperlukan untuk lampiran primer adalah individu untuk kes tertentu, ia adalah antara 50 hingga 65 ° C.
  • Dengan bantuan enzim DNA polimerase, pada 70-72 darjah antara dua primer, seksyen DNA (amplicon) yang sama telah selesai. Sebagai "bahan bangunan", bahan khas ditambah ke tiub.

Kitaran pemanjangan diulang beberapa kali, oleh itu, DNA yang diekstrak berulang kali disalin, yang menyederhanakan proses pengenalannya. Pengenalpastian boleh dilakukan secara visual selepas prosedur elektroforesis produk penguatan dalam gel agarose, atau secara automatik menggunakan teknik masa nyata.

Dalam kajian oleh PCR dalam "real time" amplifikasi dan pengesanan berlaku serentak dalam peranti khas. Kaedah ini adalah yang paling disukai, kerana kajian ini dijalankan dalam tiub tertutup, mengurangkan risiko pencemaran dan, akibatnya, pengeluaran keputusan palsu-positif.

Kebaikan dan keburukan kaedah

  • Kajian ini hanya mengambil masa beberapa jam, berbeza dengan kaedah mikrobiologi klasik yang panjang;
  • Kepelbagaian tinggi dari 95% hingga 100%, kerana fragmen DNA yang dikehendaki adalah unik untuk setiap mikroorganisma tertentu;
  • Kepekaan tinggi kaedah ini, adalah mungkin untuk mengesan patogen, walaupun ia diwakili dalam sampel di bawah kajian dengan hanya satu sel;
  • Kenal pasti patogen boleh menjadi kaedah kualitatif dan kuantitatif. Ini sangat penting dalam pengasingan mikroorganisma patogen yang kondusif, yang dalam jumlah kecil tidak menyebabkan penyakit;
  • Keupayaan untuk menentukan genotip patogen (hepatitis C, jangkitan HIV). Ia adalah perlu untuk rawatan rasional dan prognosis komplikasi yang mungkin;
  • Keupayaan untuk mengenal pasti kecenderungan genetik terhadap penyakit, dengan itu menghalang perkembangannya;
  • Hampir semua sumber jangkitan dapat dikenalpasti, dan teknik moden juga membolehkan pengesanan mikroflora agregat dalam sampel yang di bawah kajian, contohnya, biosenosis vagina.
  • Kemungkinan mendapatkan kedua-dua sampel palsu-positif dan palsu jika peraturan untuk mengambil sampel tidak diikuti dan kesilapan dibuat semasa kajian;
  • Analisis kos yang tinggi.

Permohonan

Hampir semua sampel boleh diperiksa oleh PCR (darah, urin, cecair cerebrospinal, pengikatan dari terusan serviks dan uretra, folikel rambut, air mani, dll.). Kaedah ini digunakan secara meluas untuk diagnosis STD (gonorrhea, chlamydia, ureaplasmosis, mycoplasmosis, trichomoniasis). Ia boleh digunakan untuk mengenal pasti agen penyebab tuberkulosis, difteria, pneumonia, hepatitis virus, jangkitan HIV, toxoplasmosis, cytomegalovirus dan jangkitan herpes, salmonellosis, dan sebagainya.

Reaksi rantai polimerase digunakan untuk menubuhkan paterniti dengan membandingkan DNA ibu bapa dan kanak-kanak, mengenalpasti keabnormalan genetik dan kecenderungan keturunan organisma kepada pelbagai penyakit.

Persediaan untuk analisis

  • Darah disyorkan untuk menderma dengan ketat pada perut kosong.
  • Sebelum mengambil terapi dari uretra atau kanal serviks, perlu menjauhkan diri dari seks selama tiga hari, perlu mengambil analisis tidak lebih awal daripada satu bulan selepas berakhirnya terapi antibiotik, jika tidak, hasilnya mungkin palsu. Malah patogen yang mati dikesan oleh kaedah PCR, oleh itu adalah lebih baik untuk menjalankan kajian selepas sel-sel telah diperbaharui sepenuhnya.
  • Urin harus dikumpulkan dalam bekas steril.

Jawapannya selalunya akan siap dalam beberapa hari, bergantung kepada keupayaan makmal.

Keputusan penyahkodan

Apabila menggunakan teknik kualitatif, terdapat hanya 2 kemungkinan jawapan: positif atau negatif. Hasil positif menunjukkan kehadiran mikroorganisma yang dikeluarkan dalam sampel, satu negatif menunjukkan ketidakhadirannya.

Hasil kuantitatif perlu dinilai oleh doktor yang hadir, pendekatan individu diterapkan dalam setiap kes tertentu. Pakar, dengan mengambil kira jawapan yang diterima, memutuskan persoalan perlunya rawatan, dos ubat, menentukan bentuk dan peringkat penyakit.

Apabila menentukan profil genetik (predisposisi kepada trombophilia, kanser payudara) selepas menafsirkan hasilnya, doktor dapat menilai tahap risiko penyakit ini, dan juga menetapkan diet khas, langkah pencegahan.

Adakah halaman membantu? Kongsi dalam rangkaian sosial kegemaran anda!

Apakah analisis PCR dan viral load?

Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah kaedah makmal untuk menentukan DNA dan RNA. Ia pertama kali diuji hampir setengah abad yang lalu oleh American Carey Mullis. Analisis supersensitif ini dapat mengenal pasti pembawa genom oleh satu molekul sumber tunggal yang terkandung dalam darah, air liur atau kulit.

Kaedah PCR mempunyai prospek yang hebat, digunakan bukan sahaja dalam bidang perubatan, tetapi juga dalam kejuruteraan genetik dan sains forensik. Dengan itu, klonkan dan buat jenis baru DNA, tentukan tahap kekeluargaan. Seorang penjenayah dikenal pasti oleh sekeping epitel yang ditemui di tempat kejadian.

Analisis PCR untuk hepatitis - apa yang mereka lakukan dan mengapa?

Mengapa analisis PCR diperlukan untuk disyaki hepatitis C, apa itu?

Virus Hepatitis C adalah virus RNA yang mengandungi 6 genotip dan sehingga 500 subtipe. Dari semua hepatitis, virus ini mempunyai kapasiti mutasi tertinggi dan mengatasi penghalang perlindungan sistem kekebalan tubuh. Daripada jumlah kes hepatitis, virus C menyebabkan 70% daripada kes-kes bentuk kronik dan 30% daripada sirosis dan kanser hati.

Inti dari kaedah ini: sebahagian daripada gen yang sedang diteliti dengan bantuan enzim dan syarat-syarat khas terpaksa melipatgandakan in vitro. Analisis PCR membolehkan menentukan ketegangan virus, tanpa mana mustahil untuk melakukan rawatan yang berkesan: setiap genotip berbeza dengan ubat-ubatan antiviral. Dua jenis PCR digunakan:

Terapi antiviral memerlukan pemantauan berterusan untuk segera menyesuaikan rawatan, dan untuk tujuan ini tindak balas rantai polimer juga digunakan.

PCR kualitatif dan kuantitatif

PCR kualitatif mengenai hepatitis C memberikan jawapan: adakah terdapat virus C dalam darah pesakit dan yang mana satu. Genotyping diperlukan untuk menjelaskan diagnosis, prognosis penyakit dan menentukan masa rawatan.

Menurut klasifikasi yang diterima, gen ditunjukkan dengan nombor, dan subtipe adalah huruf Latin kecil.

Penyediaan khas berdasarkan bahan semulajadi.

Harga dadah

Ulasan rawatan

Hasil pertama dirasakan selepas seminggu pentadbiran.

Baca lebih lanjut mengenai ubat ini

Hanya 1 kali sehari, 3 titik

Arahan untuk digunakan

Memecahkan jadual virus genotip C:

  • Genotype 1a, 1b, 1c
  • Genotip 2a, 2b, 2c, 2 d
  • Genotype 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
  • Genotype 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
  • Genotip 5 a
  • Genotip 6 a

Genotip yang paling biasa 1,2,3. Di Rusia, yang paling biasa adalah 1a, 1b, 2, dan 3 jenis virus C.

Genotip virus 1b lebih sukar daripada yang lain untuk dirawat, dalam 90% ia menjadi kronik, di mana 30% dilahirkan semula sebagai kanser hati atau sirosis.

Genotip 2a dan 3a mempunyai tahap kejernihan 33-50%, lebih responsif terhadap terapi antiviral.

Apabila mengesahkan kehadiran virus itu, ujian PCR kuantitatif dilakukan untuk hepatitis C, yang digunakan untuk mengira bilangan molekul RNA yang terdapat dalam sampel makmal pesakit.

Analisis penyahkodan

Analisis PCR berkualiti tinggi mempunyai dua jawapan:

PCR negatif bermakna bahawa patogen tidak dikesan dalam sampel darah.
Jawapan positif menunjukkan sebaliknya: RNA satu atau genotip lain dari virus C ditemui.

Kebarangkalian kebolehpercayaan hasilnya ialah 95%. Baki 5% adalah kesilapan yang disebabkan oleh seseorang. Kemungkinan ini dibenarkan kerana keperluan yang tinggi untuk kajian ini:

  • peraturan untuk penyimpanan reagen;
  • kelayakan yang sesuai bagi kakitangan perubatan;
  • kesucian biomaterial.

Kit PCR itu sendiri mempunyai ketepatan diagnostik 100%.

PCR kuantitatif RNA Hepatitis C membolehkan penentuan viral load pada tubuh pesakit. Dengan bantuannya:

  • peringkat penyakit dinyatakan (akut, kronik);
  • menentukan keberkesanan rawatan antiviral;
  • Keperluan untuk biopsi hati sedang disiasat.

Dalam sesetengah kes, pesakit tidak merasakan apa-apa tanda penyakit, sementara jangkitan HCV dikesan oleh kaedah PCR. Ini bermakna bahawa penyakit itu adalah pada peringkat awal pembangunan atau dalam bentuk kronik. Kajian tambahan diperlukan untuk menjelaskan diagnosis, untuk permulaan rawatan antiviral awal.

Hepatitis C viral load

Beban virus menunjukkan aktiviti virus hepatik, bagaimana secara aktif pembiakannya berlaku.

Apa ini?

PCR hepatitis C kuantitatif diukur dalam Unit Antarabangsa setiap 1 ml atau IU / ml, yang bermaksud berapa banyak salinan asid ribonukleat sesetengah virus C yang terdapat dalam 1 ml darah yang diuji.

Apa yang tinggi, apa yang rendah?

Analisis beban virus membolehkan untuk menentukan kehadiran RNA virus pada kepekatan 50 IU / ml. Beban virus normal adalah apabila tiada molekul RNA HCV dikesan oleh PCR.

Jadual beban virus:

  • kepekatan rendah 600 IU / ml 3 * 104 IU / ml;
  • kepekatan sederhana dari 3 * 104 IU / ml hingga 8 * 105 MM;
  • tahap tinggi lebih daripada 8 * 105 IU / ml.

Beban viral yang rendah adalah isyarat bahawa rawatan terapeutik dipilih dengan betul, dan prognosis untuk mengubati hepatitis C adalah baik.

Kepekatan tinggi sel-sel virus menunjukkan bahawa penyakit itu berada dalam fasa akut. Darah pesakit adalah sumber jangkitan yang berbahaya.

Beban virus, petunjuk yang berada pada paras purata, mencirikan sama ada peringkat kronik HWS, atau mungkin mempunyai dua trend pembangunan: untuk meningkatkan atau menurun.

Setelah selesai, selepas 6 bulan, kawalan PCR dilakukan.

Kos diagnostik PCR

Gejala berikut harus menjadi perhatian:

  • kelemahan umum;
  • perubahan warna kulit, sklera mata, pelepasan;
  • mual;
  • menurun selera makan;
  • sakit pada otot dan sendi;
  • berat di hipokondrium yang betul;
  • paras darah tinggi AST dan ALT.

Dalam hubungan dengan pesakit yang dijangkiti, dalam tempoh pra operasi, hemodialisis juga disemak pemeriksaan.

Klinik kerajaan melakukan ujian darah untuk PCR secara percuma jika terdapat rujukan dari pakar penyakit berjangkit atau pakar hepatologi.

Perkhidmatan yang dibayar untuk diagnosis PCR disediakan di semua bandar utama di Rusia. Kos bergantung pada jenis ujian, peralatan yang tersedia, masa dan faktor lain.

Analisis PCR berkualiti tinggi di Moscow dan St. Petersburg akan berkurangan dari 600 hingga 900 Rubles. Di kawasan - dari 300 hingga 800 rubel.

Penentuan hepatitis C viral load akan menelan 17.000-22.000 rubel. Untuk jenis lain jangkitan harga penyelidikan kuantitatif: 1200-10000 rubel.

Kelebihan dan kekurangan kaedah PCR

Apakah kelebihan kaedah tindak balas rantaian polimerase terhadap kaedah diagnostik lain?

  1. Pelbagai aplikasi. Menggunakan PCR, menggunakan peralatan standard, anda boleh mengenal pasti virus.
  2. Ketepatan penentuan patogen. Menggunakan pelbagai kombinasi enzim dan teknik analisis, spesifikasi 100% kajian untuk jangkitan yang ditunjukkan dicapai.
  3. Kepekaan yang tinggi. Kaedah ini membolehkan untuk mengesan kehadiran satu molekul virus dalam darah.
  4. Kecekapan. Analisis kualitatif sudah siap dalam beberapa jam, kuantitatif - dalam dua hari.
  5. Diagnosis virus dalam tempoh inkubasi. Semasa PCR, patogen tersebut tidak ditentukan oleh kehadiran antibodi, apabila badan mempunyai tindak balas imun, tetapi sebelum permulaan proses patologi, yang memudahkan rawatan.

Kelemahan PCR adalah hasil kelebihannya:

  • kesucian analisis memerlukan tahap kesucian tertinggi, termasuk udara di dalam makmal, supaya DNA "asing" tidak masuk ke dalam sampel yang sedang diteliti;
  • keperluan yang tinggi untuk kakitangan yang terlibat dalam pengumpulan dan analisis biomaterial.

Reaksi Rantai Polimerase - Maklumat Pesakit

Kandungan

Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah kaedah makmal yang kompleks digunakan secara meluas dalam bidang perubatan dan cabang sains yang lain. Pada satu ketika, diagnostik PCR telah menjadi satu kejayaan besar dalam bidang sains. Kita boleh mengatakan bahawa ini adalah salah satu penemuan paling penting pada abad ke-20 dalam bidang perubatan. Untuk penemuan kaedah itu, Keri Mullis, seorang saintis biokimia, menerima pada tahun 1993 sebagai Hadiah Nobel.

Untuk masa yang lama, jangkitan telah mengumpul penghormatan pahit dari manusia. Wabak itu hanya menuntut ratusan ribu nyawa di Zaman Pertengahan. Dalam memerangi wabak yang berjaya, satu titik penting adalah diagnosis tepat dan tepat pada masanya.

Kajian PCR biasanya dijalankan di makmal di klinik. Walaupun ujian PCR untuk jangkitan agak mahal, harga diimbangi oleh ketepatan yang tinggi. Untuk menubuhkan diagnosis yang tepat adalah cukup untuk melakukan analisis sekali. Apabila menggunakan kaedah lain mungkin memerlukan analisa tambahan atau berulang.

Bagaimana analisis untuk penyakit berjangkit

Selalunya, kaedah serologi dan budaya digunakan untuk mendiagnosis jangkitan. Dalam kes pertama, antibodi kepada agen penyebab jangkitan ditentukan dalam serum. Dalam kes kedua, bahan biologi yang diperoleh daripada orang sakit digunakan untuk menanam persekitaran khas yang kondusif untuk pertumbuhan koloni patogen. Dalam mana-mana kes, diagnosis boleh mengambil masa beberapa hari atau bahkan minggu.

Pemeriksaan PCR boleh dilakukan dengan bahan biologi yang diperolehi dari orang sakit. Darah dan lain-lain cecair biologi, fisiologi dan patologi dan media boleh berfungsi sebagai sampel. Anda boleh melakukan air kencing PCR atau najis.

Selalunya, kaedah PCR menentukan jangkitan virus dan atipikal, kerana mereka mungkin tidak dapat menerima diagnostik konvensional disebabkan oleh sifat proses patologi yang menyebabkannya. Untuk mendiagnosis jangkitan ini, ia memerlukan masa, di mana tubuh akan mula menghasilkan antibodi, yang ditentukan oleh kaedah serologi. Walau bagaimanapun, dalam beberapa kes ini tidak dapat diterima.

Dengan bantuan PCR, virus immunodeficiency manusia dapat ditentukan dalam beberapa hari atau minggu, secepat yang mungkin, tanpa tempoh ciri tetingkap seronegatif kaedah lain. (Tingkap seronegatif adalah selang dari masa jangkitan, di mana badan belum lagi menghasilkan antibodi yang cukup untuk pengesanan).

Kaedah menjalankan PCR - in vitro bermakna penentuan makmal bagi jangkitan dalam sampel yang diasingkan daripada pesakit.

Satu set reagen khas diperlukan untuk menjalankan tindak balas rantai polimerase.

Dalam tiub ujian dengan reagen membuat bahan yang sedang dikaji. Tiub diletakkan di dalam peranti khas - penguat PCR. Ia berfungsi untuk menguatkan (meningkatkan bilangan) serpihan DNA yang dikehendaki atau RNA. Penguat PCR dijalankan dalam mod kitaran. Setiap kitaran, jika jujukan DNA atau urutan RNA patogen hadir dalam sampel, salinan serpihan-serpihan asid nukleik ini terkumpul dalam larutan. Adalah mungkin untuk menentukan kehadiran patogen dan kuantiti dalam sampel.

Jenis PCR

Analisis oleh PCR - kualitatif memberikan hasil berikut:

  • PCR - negatif, patogen yang diingini dalam sampel tidak dikesan;
  • PCR - secara positif, corak yang terdapat dalam sampel adalah ciri satu atau patogen lain.

Apabila keputusan PCR positif, ia menunjukkan dengan ketepatan 95% kehadiran jangkitan yang didiagnosis. Ketepatan PCR kit yang digunakan untuk diagnostik mencapai 100%.

5% daripada keputusan yang salah biasanya bergantung pada faktor manusia. Oleh itu, pelanggaran kaedah penyimpanan bahan reagen dan teknik penyelidikan dapat mengurangkan ketepatan analisis.

Analisis PCR kuantitatif mendefinisikan apa-apa perkara sebagai beban virus. Pada masa yang sama, adalah mungkin untuk menentukan berapa banyak sampel patogen yang terkandung dalam sampel yang diperoleh daripada pesakit. Semakin banyak - semakin sukar jangkitan berlaku. Anda juga boleh menentukan kejayaan rawatan dengan mengurangkan beban virus.

Penghantaran biomaterial pada PCR

Analisis PCR dilakukan di klinik, biasanya pada waktu pagi. Semasa lawatan ke doktor, anda akan diberitahu bahawa anda perlu menderma: darah, air kencing, bengkak atau mengikis. PCR dapat mengenal pasti patogen tanpa mengira tahap pencemaran bahan.

Secara teori, kehadiran hanya satu patogen dalam sampel adalah mencukupi untuk analisis positif. Dalam amalan, mereka cuba mewujudkan keadaan yang lebih baik. Terdapat beberapa peraturan untuk ini:

  • Sekiranya anda mengambil cecair atau mengikis dari alat kelamin, anda harus menahan diri dari hubungan seks 3 hari sebelum ujian;
  • tidak boleh dibasuh atau dipakai dengan agen antibakteria pada malam ujian;
  • 3 jam sebelum mengambil pil smear dari uretra harus bersabar dan tidak membuang air kecil.

Sekiranya pesakit menyumbang darah, anda tidak boleh mematuhi peraturan ini.

Keputusan penyelidikan

Hasil PCR biasanya siap dalam satu hari selepas ujian. Analisis kualitatif kelihatan mudah. Penyahkodan PCR tidak diperlukan, seperti biasanya dalam lajur pertama menunjukkan patogen, dalam kedua - hasilnya. Sebagai contoh:

Pcr kuantitatif

PCR kuantitatif (kuantitatif PCR, qPCR,) adalah real-time kuantitatif PCR (tindak balas rantai polimer masa nyata, tindak balas rantai polimerase beralkali, qPCR).

PCR kuantitatif (polimer Yunani - terdiri daripada banyak bahagian, beragam - awalan Re-prefix yang menunjukkan pengulangan tindakan dan tindak balas) - satu varian PCR, di mana kinetik tindak balas terus direkodkan, yang membolehkan mengkuantifikasi kandungan urutan DNA nukleotida tertentu dalam campuran kompleks molekul.

Versi pertama kaedah ini dicadangkan oleh P. Holland et al. pada tahun 1991 (kaedah "TaqMan"). Menurut protokol itu, sebagai tambahan kepada dua primer yang biasa, satu penyelidikan oligonukleotide dilabelkan pada 5'-end dengan fluorophore dan mengandungi penyenyap pendarfluor di bahagian pusat atau 3'-bahagiannya, yang diserap dalam setiap kitaran tindak balas dengan pusat pusat amplicon (2) di antara dua penguat ditambah ke campuran reaksi primer. Siasatan itu sendiri tidak digunakan sebagai primer, kerana kumpulan hidroksil terminal 3''i disekat oleh ortofosfat. Semasa tindak balas, polimerase Taq termostable mengalihkan probe dari dupleks, dan kemudian, disebabkan oleh aktiviti 5'-3'-exonuclease, ia memecahkan nukleotida terminalnya yang berlabel fluorofore. Semakin tinggi kepekatan susunan nukleotida yang dikuatkan dalam campuran tindak balas, semakin kurang bilangan kitaran diperlukan untuk keamatan pendarfluor fluorophore yang dikeluarkan dalam sampel untuk melebihi tahap dasar penyelidikan bebas dengan penyenyap. Dari saat ini (ambang bilangan siklus) ia menjadi mungkin untuk mengamati kinetik dari pengumpulan sebenar fluorophore dalam campuran tindak balas.

Menggunakan kaedah PCR kuantitatif, perubahan kualitatif dalam gen dijumpai: mutasi titik, penghapusan dan penyisipan. Walau bagaimanapun, dalam beberapa penyakit keturunan, gejala yang bersesuaian berlaku sebagai tindak balas terhadap perubahan dalam dos gen tertentu.

Satu contoh tipikal penyakit keturunan yang disebabkan oleh perubahan dalam bilangan salinan sebahagian kromosom 21 dalam genom manusia ialah sindrom Down. Cytogenetically, penyakit ini boleh didiagnosis oleh trisomi kromosom 21 atau dengan adanya pemindahan besar sebahagian dari kromosom ini kepada orang lain, terhadap latar belakang kehadiran dua kromosom normal 21. Kes-kes klinikal Down syndrome yang tidak terdapat perubahan dalam karyotype dijelaskan. Ini disebabkan oleh pertindihan sebahagian kecil kromosom 21. Pengenalan mutasi tersebut adalah mustahil menggunakan kaedah cytogenetic tradisional. Walau bagaimanapun, dengan menggunakan PCR kuantitatif, penentuan satu setengah peningkatan dos bahagian kromosom 21 yang sama menjadi benar-benar nyata.

Melakukan PCR kuantitatif dicirikan oleh dua ciri. Pertama, PCR dijalankan dengan kehadiran trifosfat deoksiribonukleosida atau primer yang dilabel dengan label radioaktif atau pendarfluor untuk menentukan dengan tepat jumlah produk PCR yang terbentuk. Kedua, semasa PCR, adalah perlu untuk menyelesaikan tindak balas yang cukup awal, sehingga terlalu banyak produk PCR terbentuk. Ini disebabkan fasa tepu akhir, apabila produk PCR menjadi terlalu banyak, substrat (deoxyribonucleoside triphosphates) dan enzim itu sendiri, yang mana molekul menjadi terlalu banyak template DNA dalam bentuk produk PCR, menjadi unit penghadiran reaksi. Di bawah keadaan sedemikian, penyiapan kitaran PCR yang berikutnya tidak lagi diiringi oleh dua kali ganda jumlah produk PCR dan perbezaan kuantitatif kecil disamakan antara sampel yang berbeza, yang agak jelas dikesan pada peringkat awal PCR selepas beberapa reaksi kitaran.

Kaedah asal untuk mengenal pasti penghapusan yang heterozigot atau setempat dalam gen autosomal adalah berdasarkan penggunaan cDNA yang diperolehi oleh transkripsi terbalik dari mRNA ektopik atau dari mRNA yang diasingkan dari tisu atau budaya sel pesakit yang menyatakan gen ini untuk PCR. Berbeza dengan homolog biasa, dalam molekul cDNA mutan, ekson yang bersempadan dengan pemadaman adalah berdekatan. Jika sekatan dari kawasan-kawasan ini gen dipilih sebagai oligoprimer untuk PCR, hanya cDNA mutan akan berfungsi sebagai templat untuk menguatkan rantau kecil antara primer dari exon mengapit penghapusan. Dalam urutan cDNA biasa, rantau ini mungkin terlalu besar untuk penguatan untuk berlaku. Secara praktikal untuk pengesanan heterozigot oleh bahagian intragenik yang luas, PCR multiplex dilakukan dengan menggunakan sistem oligoprimer yang menguatkan serpihan yang benar-benar bertindih seluruh molekul cDNA. Kehadiran penghapusan dicatatkan oleh rupa produk penguatan saiz luar biasa.

Lihat juga Transkripsi Songsang - Reaksi Rantaian Polimer Masa Nyata.

Glosari Bioteknologi VZ Tarantula: indeks abjad Ligasi kaedah "di kawasan kejiranan", kaedah ligation rapat (assay ligation pro-ximity, PLA) Beacon molekular (beacon molekul)

Diagnostik PCR tidak hanya membenarkan untuk menentukan kehadiran virus hepatitis B dalam darah dan etiologinya, tetapi juga untuk menilai aktivitinya. Pengesanan beban virus sangat penting untuk pemilihan rawatan yang berkesan, jika terlalu tinggi, maka kebarangkalian pemulihan berkurangan. Apakah intipati kaedah tindak balas rantai polimerase?

Intipati diagnostik PCR

Dalam kes hepatitis, PCR dilakukan untuk memastikan diagnosis dibuat. Dengan menggunakan kaedah ini, anda boleh mengenal pasti DNA virus, serta menentukan jumlahnya dalam darah.

Virus DNA dalam darah oleh kaedah PCR untuk hepatitis boleh dikesan pada akhir tempoh inkubasi, pada masa ini HBsAg dapat dikesan terhadap latar belakang tahap peningkatan transaminase, yang kemudian muncul HBeAg.

Dengan definisi kualitatif, anda boleh menentukan diagnosis secara tepat, ada atau tidak ada hepatitis. Biasanya, tidak ada DNA dalam darah. Kaedah kuantitatif membolehkan menentukan intensiti perkembangan penyakit dan pembiakan virus.

Analisis ini mempunyai kepekaan dan kebolehpercayaan yang sangat tinggi. Sebagai bahan biologi mengambil darah vena. Terima kasih kepada teknologi moden, PCR dapat mengesan virus pada kepekatan 5 × 103-104 salinan / ml dalam darah. Mengikut keputusan analisis, mengetahui norma, adalah mungkin untuk menilai beban virus dan meramalkan rawatan.

Ia penting! Ia adalah DNA virus yang menyumbang kepada perkembangan sirosis dan penyakit hati kronik yang lain.

Pengesanan DNA oleh PCR adalah perlu dalam kes berikut:

Keraguan dalam perumusan analisis akhir selepas ujian. Penentuan tahap penyakit akut. Pengesanan bentuk laten hepatitis. Penilaian keberkesanan selepas terapi antiviral.

Bagaimana untuk menguraikan keputusan yang diperolehi selepas diagnostik PCR?

Kuantitatif PCR

Dengan penilaian kuantitatif, anda tidak boleh hanya menentukan kehadiran virus, tetapi juga mengetahui beban virus, jika PCR menunjukkan hasil yang positif.

Kaedah kuantitatif diperlukan untuk mengetahui maklumat tersebut:

Keamatan perkembangan penyakit ini. Keberkesanan rawatan. Pembangunan rintangan terhadap ubat-ubatan antiviral.

Pengiraan adalah sangat penting apabila membuat diagnosis hepatitis kronik. Dalam kes ini, semua penunjuk tidak akan berada dalam julat normal. Tahap transaminase akan meningkat, indeks aktiviti virus lebih dari 4, dan kepekatan DNA DNA akan lebih daripada 105 naskhah DNA / ml. Sekiranya kepekatan virus lebih rendah dan paras transaminase adalah normal, maka kita boleh bercakap mengenai pembawa pasif.

Sebelum pelantikan rawatan antivirus, laluan diagnostik PCR, iaitu pemeriksaan kuantitatif, adalah penting untuk menentukan beban virus.

Lakukan analisa setiap 3 bulan, dan jika viral load meningkat sebanyak 10 kali, maka kita boleh membicarakan rintangan virus untuk rawatan.

Analisis kuantitatif memberikan maklumat yang sangat penting, kerana anda boleh menentukan berapa banyak DNA patogen dalam darah. Semakin besar kuantiti, semakin besar beban virus dan semakin parah keadaan pesakit. Dengan mengurangkan beban virus selepas menjalani rawatan, seseorang boleh menilai keberkesanannya. Dalam beberapa kes, PCR untuk hepatitis adalah petunjuk untuk ujian tambahan, seperti biopsi hati. Pada tahap tinggi ALT, PCR dilakukan. Decryption of tests adalah seperti berikut: jika viral load lebih daripada 105 salinan DNA / ml, dan tahap ALT melebihi norma, tetapi tidak lebih daripada 2 kali lebih dari setengah tahun, maka pesakit seperti itu memerlukan biopsi. Dengan keradangan atau fibrosis yang kuat, rawatan antiviral ditunjukkan. Jika tahap ALT melebihi norma lebih daripada 2 kali dengan beban virus yang tinggi, maka rawatan segera ditetapkan tanpa diagnostik tambahan.

Hanya pakar yang baik dapat menguraikan dengan betul hasil PCR kuantitatif.

Kualiti PCR

Analisis kualitatif membolehkan menentukan kehadiran hepatitis B dalam darah. Biasanya, ia seharusnya tidak hadir. Dengan kaedah ini, anda boleh menentukan diagnosis secara tepat.

Analisis PCR berkualiti tinggi memberikan hasil 100% tepat.

Tiada kaedah lain yang menyediakan data yang boleh dipercayai itu. Dalam lebih daripada separuh daripada kes selepas lulus diagnosis, DNA virus dikesan, tanpa adanya antigen. Ia adalah sangat penting untuk menentukan diagnosis pada peringkat awal penyakit ini.

Dibuktikan bahawa jika DNA virus hepatitis B secara aktif menghasilkan semula dalam tubuh manusia selama dua bulan, penyakit itu menjadi kronik. Sekiranya kita mula memerangi virus itu pada minggu pertama selepas jangkitan, maka kemungkinan pemulihan penuh adalah sangat tinggi.

Bagaimanakah penyahkodan hasil kajian yang diperoleh menggunakan kaedah kualitatif?

Analisis penyahkodan sangat mudah:

Biasanya, hasilnya harus negatif, iaitu, DNA virus tidak dikesan. Hasil positif menunjukkan kehadiran hepatitis.

Analisis ini membantu mengenal pasti virus, menentukan genotipnya dan memulakan rawatan tepat pada masanya. Selalunya, di hadapan DNA, bersama dengan penilaian kualitatif, mereka juga menjalankan satu kuantitatif.

Bagaimana untuk mempersiapkan kaji selidik?

Apabila menganalisis hepatitis menggunakan diagnostik PCR, darah diambil dari urat. Adalah lebih baik diperiksa pada waktu pagi, kerana darah mesti selalu disumbangkan pada perut kosong (selepas makan terakhir, sekurang-kurangnya 8 jam harus lulus).

Agar analisa dapat dipercepat mungkin, pesakit mesti mengetahui beberapa faktor yang mungkin mempengaruhi keputusan akhir:

Sebelum anda menderma darah dari urat, anda perlu berehat selama 20 minit. Di samping itu, analisis diberikan pada perut kosong, jadi selama 12 jam lagi anda tidak boleh minum alkohol, merokok, bermain sukan dan makan makanan berlemak. Sesetengah ubat-ubatan yang perlu diambil oleh pesakit boleh menjejaskan keputusan akhir. Juruteknik makmal perlu mengetahui kes rawatan ubat. Sekiranya darah perlu disumbangkan kepada kanak-kanak di bawah umur 5 tahun, maka dalam kes ini adalah perlu untuk meminumnya setiap 10 minit, setengah jam sebelum diagnosis. pada segelas air masak.

Sangat penting untuk menjalani PCR di klinik yang telah bekerja dengan baik. Memang, walaupun PCR mengesan kehadiran virus dengan ketepatan sehingga 100%, angka ini boleh dikurangkan kepada 95%, memandangkan faktor manusia.

Juruteknik yang tidak memenuhi syarat atau reputasi buruk boleh mengakibatkan keputusan palsu.

Analisis PCR kuantitatif bertujuan untuk menentukan kepekatan

Reaksi rantai polimerase (PCR) hari ini merupakan salah satu kaedah diagnostik yang paling berkesan.

Ia memberikan hasil yang paling tepat dan boleh dipercayai.

Bahan kajian ini adalah:

Dengan bantuan PCR, walaupun jangkitan laten, khususnya, jangkitan seksual, didiagnosis.

Inti dari analisis ini adalah untuk mengesan genom patogen dalam bahan di bawah kajian oleh sintesis berulang molekul DNAnya.

Menggunakan PCR, bakteria, virus, protozoal, dan jangkitan kulat boleh didiagnosis.

Kesalahan maksimum dalam kajian ini tidak melebihi 5%.

Di samping itu, hasilnya boleh didapati pada hari ujian.

Terdapat dua jenis analisis oleh PCR:

Kaedah kualitatif dilakukan untuk mengesan agen penyebab penyakit dalam biomaterial.

Analisis Kuantitatif PCR

Reaksi rantai polimerase - satu kaedah diagnosis makmal.

Ujian PCR digunakan secara meluas dalam bidang perubatan.

Ini disebabkan oleh ketepatan yang tinggi.

Asas kaedah adalah penentuan DNA mikroorganisma.

Menjalankan diagnostik PCR, sebagai peraturan, di makmal.

Apabila analisis kuantitatif PCR dan darah diperlukan

Kaedah ini digunakan dalam urologi, ginekologi, venereologi.

Selalunya ia perlu untuk diagnosis.

Dengan bantuan ujian PCR, anda boleh mengesan penyakit seperti:

  • Gonorrhea
  • Sifilis
  • Ureaplasmosis
  • Chlamydia
  • Trichomoniasis
  • Papillomavirus manusia.

Kaedah ini juga digunakan dalam penyediaan darah penderma.

Ia mengelakkan risiko pemindahan darah yang dijangkiti.

Analisis kuantitatif PCR bertujuan untuk menentukan kepekatan patogen dalam tubuh, i.e. penilaian tahap "penularan" pesakit.

PCR kuantitatif adalah kaedah yang sangat diperlukan untuk diagnosis makmal hepatitis C.

Dengan bantuannya, kandungan dalam darah pesakit ditentukan oleh RNA virus, menyatakannya dalam IU (unit antarabangsa) atau salinan setiap 1 ml.

Dalam kes di mana hepatitis C sudah didiagnosis, analisis kuantitatif PCR dilakukan mengikut skim berikut:

Adakah perlu untuk mempersiapkan analisis PCR kuantitatif?

Tidak, latihan khusus dalam kes ini tidak diperlukan.

Satu-satunya keadaan adalah menahan diri dari merokok 30 minit sebelum menderma darah.

Kuantitatif PCR: hepatitis C

Hepatitis C adalah penyakit berjangkit yang menyerang hati.

Jangkitan menembusi darah.

Untuk mengenal pasti agen penyebab penyakit ini, ujian PCR kuantitatif digunakan.

Ia menentukan kepekatan patogen dalam darah pesakit.

Untuk menentukan sejauh mana penyakit itu, buat RNA hepatitis C secara kuantitatif.

Selalunya, PCR hepatitis C dilakukan selepas pengesanan antibodi yang berkaitan.

Selepas itu, ujian dilakukan pada 4, 12, 24 minggu dan kemudian dalam setahun.

Hasil analisis kuantitatif PCR dalam diagnosis hepatitis C

Untuk lulus bahan yang betul untuk analisis PCR adalah penting.

Walau bagaimanapun, anda perlu dapat menguraikan keputusan dengan betul.

Bagaimana untuk mentafsirkan hasil analisis kuantitatif PCR dalam diagnosis hepatitis C dan menentukan keberkesanan rawatannya?

Perlu diingat bahawa virus hepatitis C adalah sangat heterogen, tahan kepada persekitaran luaran.

Dengan kepekatan yang rendah dalam darah, penularannya melalui cara menegak atau melalui hubungan seksual tidak mungkin.

Jangkitan dan penyakit dalam kes seperti ini lebih kerap berlaku pada orang yang mempunyai sistem imun yang lemah.

Atau penyakit berjangkit yang bersamaan dengan saluran kencing (HIV, jangkitan genital).

Venerologi, untuk lulus analisis kuantitatif PCR

Ingat! Menyahsulit data hanya perlu doktor.

Ia mungkin untuk mendapatkan hasil yang salah.

Ia bergantung kepada bagaimana bahan itu diangkut, tempat kerja di mana darah diambil untuk penyelidikan, pelanggaran teknologi analisis.

Oleh itu, anda harus memberi perhatian maksimum apabila memilih makmal.

Smear PCR kuantitatif pada klamidia

Sebelum anda mengambil ujian PCR untuk jangkitan ini, anda harus tahu bagaimana untuk menyediakan analisis.

Perhatian! Wanita tidak mengambil bahan semasa kitaran haid.

Pecahan harus diambil hanya jika peraturan tertentu dipatuhi:

  • Jangan gunakan suppositori faraj sebelum ujian.
  • Menolak daripada hubungan seksual pada masa analisis
  • Dua minggu sebelum nota penyelidikan antibiotik

Selesema pada wanita yang diambil dari vagina.

Lelaki membuat pengikatan dari uretra.

Bahan ini diambil dengan probe steril khas, selepas itu ia diletakkan dalam tiub steril.

Hasilnya boleh:

  • Negatif - tiada jangkitan dalam bahan biologi;
  • Positif - Chlamydia hadir dalam smear.

Analisis PCR kuantitatif: jenis HPV 21

Dengan menggunakan kaedah ini, anda boleh segera menentukan jenis virus.

Jenis HPV ini adalah perkara biasa.

HPV, terdapat lebih daripada 100 spesies.

Kebanyakannya memberi kesan kepada kulit, selaput lendir yang tersisa.

Terdapat spesies yang boleh menyebabkan kanser, seperti kanser serviks.

Untuk analisis melakukan pengumpulan sel epitelium dari serviks.

Keputusan mungkin seperti berikut:

  • Risiko tidak dikesan 0-3 kg (HPV / 105)
  • Kemunculan displasia 3-5 Lg (HPV / 105)
  • Kebarangkalian kemungkinan displasia 5 dan Lg yang lebih tinggi (HPV / 105)

DNA PCR: dikesan

Hasil analisis PCR adalah positif - dalam bahan biologi pesakit, serpihan DNA mikroorganisma didapati.

Sekiranya anda mendapat keputusan ini, mulakan rawatan secepat mungkin.

Ada kes yang hasilnya positif, tetapi orang itu merasa normal, dan tidak ada tanda-tanda penyakit.

Ini mungkin bermakna penyakit itu berada pada tahap awalnya.

Dalam kes ini, anda perlu berunding dengan doktor dan memulakan rawatan.

Perhatian! Hasil analisis bukanlah diagnosis. Rejimen rawatan mesti ditetapkan oleh doktor.

Jika perlu, seorang pakar akan melantik untuk menjalani kajian berulang,

Kepada doktor untuk mengubah analisis kuantitatif PCR

Untuk membuat analisis PCR kuantitatif, anda mesti menghubungi klinik.

Peralatan makmal moden menyediakan analisis PCR yang tepat.

Anda boleh lulus smear apabila anda melawat pakar venereologi.

Doktor akan memeriksa dan mengambil bahan untuk penyelidikan.

Selepas menerima keputusan, pakar akan membantu anda menguraikan hasilnya dan menetapkan rawatan yang diperlukan.

Dapatkan konsultasi yang komprehensif mengenai ahli botani yang berpengalaman, menjalani analisis kuantitatif PCR, serta kursus terapi berkesan, anda boleh menghubungi KVD yang dibayar.

Ingat bahawa diagnosis yang berkualiti dan tepat pada masanya adalah kunci kepada rawatan yang berjaya dan peluang untuk pemulihan.

Bagaimana kuantitatif
Analisis PCR memberitahu
Leftenan Kolonel Perkhidmatan Perubatan,
Doktor Lenkin Sergey G.

Sekiranya perlu, apa-apa analisis PCR kuantitatif, termasuk hepatitis C, hubungi pengarang artikel ini - pakar senaman, ahli urologi di Moscow dengan pengalaman selama 15 tahun.

  • darah
  • air kencing
  • jus prostat
  • cecair seminal
  • kualitatif dan kuantitatif
  • Sebelum permulaan ubatnya
  • 1 minggu selepas memulakan terapi
  • Pada minggu ke 4 rawatan
  • Pada minggu ke-12 - pada masa ini penentuan kuantitatif PCR membolehkan untuk menilai keberkesanan terapi penyakit
  • Pada minggu ke-24 terapi - peperiksaan akhir untuk mengesahkan pemulihan
  • Tahap viremia, atau viral load (kepekatan virus dalam darah) 800,000 IU / ml dianggap tinggi.

Mendapatkan hasil ini bermakna fasa akut penyakit atau pengaktifan semula virus.

Penunjuk ini menunjukkan tahap infektif yang tinggi, "penularan" seseorang. Hakikat bahawa bahaya dijangkiti virus dari dia kini sangat tinggi.

  • Penunjuk 400 000 IU / ml menunjukkan kandungan virus yang rendah.

Ini boleh diperhatikan dengan tahap ketahanan badan yang tinggi.

Akibatnya, pembiakan dan aktiviti virus itu ditindas. Atau apabila pulih, terima kasih kepada terapi yang berkesan.

Dalam sesetengah kes, hasil analisis menunjukkan penunjuk "di bawah julat ukur."

Ini bermakna kepekatan virus dalam darah boleh diabaikan.

Tetapi, bagaimanapun, virus itu terdapat di dalam badan, yang mengesahkan PCR berkualiti tinggi.

Satu entri dalam bentuk hasil analisis "Tidak dikesan" menunjukkan bahawa tiada virus dalam darah pesakit.

Analisis PCR untuk Hepatitis C

Diagnosis hepatitis termasuk pelbagai ujian untuk menentukan kehadiran virus dalam darah. Salah satu cara untuk mengesan penyakit adalah seperti kaedah penyelidikan sebagai PCR untuk hepatitis C. Apakah itu, mengapa analisis PCR untuk hepatitis sama pentingnya dilakukan dan diuraikan?

Apa itu

Reaksi rantai polimerase, atau PCR, digunakan untuk mendiagnosis ulser gastrik, kolitis, enteritis. Tetapi kelebihan utamanya terletak pada fakta bahawa ia membantu untuk mengesan dalam badan baik virus hepatitis C dan antibodi kepadanya, yang mempunyai keupayaan untuk tidak menyebabkan reaksi sistem imun kerana kemampuan mereka untuk bermutasi.

Kajian dan terasnya terletak pada penciptaan keadaan-keadaan tertentu di mana tindak balas rantai Hepatitis RNA berlaku. Jika, jika dibandingkan dengan urutan nukleotida virus hepatitis C, kebetulan dijumpai, ini menunjukkan bahawa terdapat zarah virus dalam darah, dan proses pemisahan berlaku di hati. Jika jumlah virus berada di bawah tahap tertentu, diagnosis negatif dibuat, dan jika lebih tinggi, yang positif.

Terdapat dua jenis ujian darah menggunakan kaedah PCR untuk hepatitis: analisis kuantitatif dan analisis kualitatif.

PCR kuantitatif, seperti yang dinyatakan di atas, menentukan kepekatan RNA virus hepatitis. Di samping itu, beliau dapat memberi maklumat tentang keamatan yang patologi berkembang, dan keberkesanan rawatan yang ditetapkan. Analisis kuantitatif hepatitis C sangat penting kerana ia membetulkan ketahanan terhadap tindakan ubat antivirus dan membolehkan anda menyesuaikan terapi.

Selepas pesakit menjalani rawatan, PCR membantu menentukan urutan pelantikan selanjutnya. Dalam beberapa kes, keperluan untuk tinjauan tambahan. Sebagai contoh, jika tahap ALP meningkat (tetapi tidak lebih daripada 2 kali dalam tempoh enam bulan), dan transkrip analisis menunjukkan beban virus di atas 105 IU / ml, pesakit ditetapkan sebagai biopsi. Jika analisis kuantitatif PCR menunjukkan keradangan yang kuat dan fibrosis, pesakit dirawat sebagai rawatan dengan ubat-ubatan antiviral.

Dalam keadaan di mana sejumlah besar zarah virus digabungkan dengan ALT yang tinggi, pesakit harus segera dirawat tanpa langkah diagnostik tambahan.

Ambil ujian ini dan ketahui jika anda mempunyai masalah hati.

Hanya pakar yang berpengalaman dan berpengalaman yang dapat menguraikan secara kualitatif dalam analisis kuantitatif darah untuk hepatitis, dan teknologi moden membantu melakukan ini dengan konsentrasi rendah virus dalam darah.

Analisis kualitatif PCR bertujuan untuk menentukan dan mengesahkan kehadiran sebenar virus dalam tubuh. Ia dilakukan apabila antibodi untuk hepatitis dikesan dalam darah. Ia adalah analisis kualitatif mengenai hepatitis yang menjamin ketepatan hasilnya dengan 100% dan membolehkan anda membuat diagnosis pada peringkat awal penyakit, yang memungkinkan untuk memulakan perjuangan terhadap hepatitis sudah pada minggu pertama selepas jangkitan dan meningkatkan kemungkinan pemulihan lengkap (dalam kes penyakit jenis B).

Faedah PCR

Dalam kajian oleh PCR dan menguraikan ujian darah untuk hepatitis, anda juga boleh menentukan genotip patogen tersebut. Secara keseluruhan, terdapat 6 genotip virus dan sebilangan besar subtipe, bagaimanapun, di rantau kita, 1, 2 dan 3 genotip telah menjadi biasa.

Kelebihan lain dari diagnosis jenis ini adalah:

  • ketepatan tinggi penunjuk yang diperoleh dan kebarangkalian kesalahan yang rendah di dalamnya;
  • tahap kepekaan yang tinggi terhadap zarah virus dalam darah;
  • kemungkinan mengenal pasti beberapa patogen sekaligus;
  • diagnosis mikroorganisma intraselular patogen dengan variabiliti antigenik yang tinggi;
  • bekerja dengan penyahkodan analisis untuk hepatitis membolehkan anda mengesan jangkitan semasa tersembunyi.

Siapa yang dilantik?

Kategori orang berikut harus lulus analisis PCR untuk hepatitis:

  • wanita hamil;
  • kakitangan penjagaan kesihatan;
  • penderma darah dan organ yang berpotensi;
  • mereka yang mempunyai ciri-ciri tanda penyakit;
  • Individu yang dijangkiti HIV;
  • penagih dadah;
  • rambang.

Bagaimanakah analisa dijalankan dan adakah perlu untuk mempersiapkannya

Sampel darah untuk PCR dilakukan dari urat. Sebagai peraturan, ini berlaku pada waktu pagi sebelum orang makan, kerana selepas makan, sekurang-kurangnya 8 jam harus lewat. Dalam kes-kes yang teruk, darah boleh diambil untuk pemeriksaan siang atau petang, tetapi jurang masa antara analisis dan pengambilan makanan hendaklah sekurang-kurangnya 5 jam.

Faktor manusia secara kuantitatif boleh menjejaskan keputusan: ketepatan mereka dalam sesetengah kes berkurangan dari 100% hingga 95%, oleh itu perlu untuk menyediakan derma darah terlebih dahulu. Kualiti biomaterial untuk analisis akan sesuai apabila pesakit mengikuti peraturan berikut:

  • sebelum memberi darah, anda hanya boleh minum air bersih;
  • dua hari sebelum kajian, adalah perlu untuk menolak untuk menerima makanan goreng dan lemak, serta minuman beralkohol;
  • sehari sebelum lawatan ke makmal harus berhenti mengambil ubat. Jika ini tidak mungkin, adalah penting untuk memberitahu juruteknik makmal dan doktor yang hadir;
  • sehari sebelum anda perlu mengelakkan situasi yang tertekan dan penuaan fizikal;
  • ultrasound, pemeriksaan sinar-X dan ujian instrumental tidak boleh dilakukan sejurus sebelum derma darah;
  • dalam satu jam sebelum analisis, anda mesti menahan diri dari merokok;
  • 20 minit sebelum menderma darah, anda perlu terganggu, tenang dan bernafas.

Sekiranya seorang kanak-kanak berusia di bawah 5 tahun lulus kajian, ibu bapa harus memastikan bahawa dia minum air rebus setiap 10 minit selama setengah jam sebelum mengambil biomaterial.

Dekri data yang diterima

Penyahkodan analisis boleh diwakili oleh kata-kata (dalam hal kajian kualitatif), contohnya, "tidak dikesan" atau "di bawah julat perubahan". Dalam kes pertama, ini menunjukkan bahawa jangkitan tidak dikesan. Pada yang kedua - bahawa virus hadir, tetapi dalam kuantiti yang kecil. Keadaan ini memerlukan penyelidikan semula.

Beban virus ditentukan oleh jumlah RNA berjangkit dan dirujuk sebagai IU / ml atau salinan / ml.

Penunjuk normal (norma) analisis kuantitatif untuk hepatitis C adalah julat dari 1.8x102 hingga 2.4x107 IU / ml.

Kepekatan virus dalam darah boleh:

  • rendah: dari 600 IU / ml hingga 3x10 4 / ml;
  • sederhana: dari 3x10 4 IU / ml hingga 8x10 5 IU / ml;
  • tinggi: lebih daripada 8x10 5 IU / ml.

Analisis kuantitatif dan kualitatif PCR untuk hepatitis membolehkan untuk menentukan kehadiran virus dalam badan dan tahap kepekatannya. Reaksi rantai multi-dimensi dapat mendiagnosis penyakit ini pada peringkat awal, tetapi untuk ini, pesakit akan segera menghubungi institusi perubatan untuk membantu dan dengan ketat mengikuti cadangan doktor yang menghadiri.

Analisis Kuantitatif PCR

Kaedah kuantitatif PCR adalah kajian makmal yang membolehkan anda mengenalpasti patogen dan menentukan jumlahnya dalam tubuh. Kaedah ini membolehkan bukan sahaja untuk mengesan mikroorganisma, tetapi juga untuk memahami sama ada ia boleh menyebabkan penyakit.

Khususnya adalah analisis kuantitatif PCR dalam diagnosis dan rawatan jangkitan virus.

Ia penting! Dengan PCR standard, penentuan kuantitatif patogen tidak mungkin.

Analisis ini tidak sesuai untuk diagnosis penyakit yang tepat yang menyebabkan patogen oportunistik.

Analisis kuantitatif PCR: intipati kaedah

PCR, atau reaksi rantai polimerase, mengesan serpihan bahan DNA dan RNA mikroorganisma.

Analisis ini berkesan untuk mengenal pasti semua jenis mikroorganisma:

Dalam kajian ini terdapat penyebaran selektif DNA atau RNA di bawah pengaruh enzim.

Ini memungkinkan untuk menentukan patogen walaupun dengan kandungan yang rendah dalam bahan tersebut. Jumlah PCR kuantitatif selepas setiap kitaran salinan. Disebabkan ini, pada akhir analisis, beban berjangkit pada badan menjadi diketahui.

Analisis Kuantitatif PCR: Manfaat

Kaedah ini mempunyai beberapa kualiti positif berbanding dengan kajian makmal lain:

  • Ketersediaan analisis cepat - dalam masa 24 jam
  • Spesifik - PCR mendedahkan secara tepat mikroorganisma yang dicari
  • Tahap kepekaan yang tinggi - hanya beberapa sel patogen
  • Keupayaan untuk mengira bilangan mikroorganisma
  • Anda boleh menentukan ketegangan spesifik patogen tersebut
  • PCR mengesan mikroorganisma sebelum tindak balas imun.
  • Keupayaan untuk mengetahui keberkesanan terapi

Gabungan faktor-faktor ini menjadikan analisis kuantitatif analisis makmal ketepatan PCR tinggi. Kajian yang dilakukan di mana-mana peringkat penyakit ini. Satu lagi kelebihan PCR kuantitatif ialah keupayaan untuk menyiasat sebarang jenis bahan. Darah, air kencing, lendir mukus, air mani, sampel tisu digunakan untuk analisis.

Kelemahan kaedah ini boleh dianggap sebagai kos yang agak tinggi. Ini disebabkan oleh harga tinggi peralatan yang diperlukan untuk analisis.

PCR: kaedah kuantitatif untuk diagnosis hepatitis C

Kaedah serologi yang standard tidak membenarkan menentukan jumlah virus dalam badan. Untuk mengetahui dengan ujian sedemikian, tahap perjalanan penyakit tidak mungkin. Apabila ujian PCR dilakukan, kaedah kuantitatif tepat mengesan beban virus.

Menggunakan ujian ini, anda boleh menentukan sama ada virus itu boleh menyebabkan kerosakan yang ketara kepada tisu hati.

Ingat! Semakin rendah kandungan virus dalam darah, semakin rendah kemungkinan jangkitan dengan pasangan seksual mereka.

Dalam hepatitis C, PCR kuantitatif dilakukan sebelum permulaan rawatan dan selepas 12 minggu terapi. Beban virus dianggap tinggi pada kadar di atas 800 * 10 3 atau 800.000 ME / ml.

Jika hasil kajian melebihi 1 * 10 7 ME / ml, ini bermakna kandungan virus yang sangat tinggi.

Keputusan sedemikian pada latar belakang rawatan menunjukkan tidak berkesan terapi terpilih. Jika, selepas permulaan kursus ubat, titers PCR kuantitatif dikurangkan, ini bermakna rawatan itu berkesan. Keputusan mengenai keberkesanan kursus dan pembetulannya hanya boleh dilakukan oleh doktor yang hadir.

PCR kuantitatif untuk hepatitis C memerlukan kajian simulasi parameter darah biokimia. Ia adalah perlu untuk memantau tahap transaminase hepatik dan menilai kerosakan hati.

Kaedah kuantitatif PCR dilakukan di makmal klinik kami. Mengikut hasil kajian, anda boleh mendapatkan nasihat perubatan.

Untuk lulus analisis kuantitatif PCR boleh berada di klinik kami, sila hubungi kami.

Artikel Seterusnya

Profetal